检测Asssay(ELISA/Lateral-flow)开发服务介绍
- 抗原设计:根据所制备的单克隆抗体(或多克隆抗体)最终使用目的,选取含抗原表面线性优势表位的序列片段用于蛋白表达纯化及免疫,具体过程及结果请参见附带的《抗原设计报告》。
- 蛋白表达及纯化:表达目的蛋白片段及全长蛋白,蛋白量分别不低于5 mg/个,纯度不低于85%。
- 免疫原制备:根据蛋白的具体特点进行一定修饰后,将蛋白与等体积的福氏佐剂混合乳化均匀,成油包水状态,以备免疫。
- 小鼠免疫:本项目至少设计1个片段或全长蛋白,分别、单独免疫4只小鼠,共计免疫8只小鼠,取血测试血清ELISA滴度不低于1:20000。
- 新西兰兔免疫(备选):用上述蛋白,分别免疫2只兔子,取血测试血清ELISA滴度不低于1:20000。
- 细胞融合及筛选:脾脏免疫后72 hr,取小鼠脾脏制成单细胞悬液与SP2/0细胞进行融合。本项目单抗株的筛选都采用间接ELISA法,筛选阳性克隆不低于50个。
- 腹水诱导及抗体纯化:分批挑选阳性克隆细胞株注射小鼠进行腹水诱导,并抽取腹水进行抗体纯化。
- 配对筛选:对制备得到的所有抗体进行HRP标记,然后进行交叉配对实验,筛选配对抗体组合。
- 最适抗体配对筛选及验证:使用筛选到的候选配对抗体详细调试包被、标记等缓冲体系及反应模式,同时摸索最优HRP标记条件等,以筛选得到最适抗体配对。
- 酶联免疫吸附法试剂盒(ELISA)开发:使用最优配对抗体进行各项分析性能验证、稳定性研究和实际标本评价等;免疫层析试纸条(Lateral flow)开发:将所筛选到的有活性的抗体进行免疫层析平台验证,筛选,以筛选得到适合免疫层析平台的抗体配对。
- 结果交付:ELISA试剂盒(96T)10个或免疫层析试纸条200条;配对抗体各2 mg;项目技术报告(试验方法、试验过程、试验结果)。
依上述服务内容及交付标准计算,周期约为4~6个月。