博梵小剧场系列篇之走进免疫层析
侧向层析测定(LFAs)是在生物医学、农业、食品和环境科学中流行的低成本、简单、快速和便携检测设备背后的技术。
本文将会概述该方法的原理和检测的关键组成部分,以及所需要的设备、原料、耗材,重点介绍侧向层析免疫测定。
简介
侧向层析测定(LFA)是一个基于纸张的平台,用于检测和量化复杂混合物中的分析物,将样品放在测试设备上,5-30分钟内显示结果。
LFA的低开发成本和易生产性使其应用扩展到需要简单快速测试的多个领域。基于LFA的测试被广泛用于医院、兽医、质量控制、食品安全以及环境健康安全,用于定性和定量检测特定的抗原和抗体,以及基因扩增的产物。各种生物样本都可以用LFAs进行测试,包括尿液、唾液、汗液、血清、血浆、全血和其他液体。在这些领域的利用中,快速测试被用来筛选动物疾病、病原体、化学品、毒素和水污染物等。
根据所使用的识别要素,LFA可分为不同类型。本文侧重于‘侧向层析免疫测定’(LFIAs),其中完全使用抗体作为识别元素。核酸LFA用于检测聚合酶链反应(PCR)期间可能形成的扩增子。
所需设备耗材
简单列了一些清单(如下),其中型号规格的选择需要根据不同实验方法/体系去对应选择。
设备、耗材清单 |
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设备 |
试剂耗材 |
紫外探照灯 |
塑料卡壳 |
斩切机 |
PVC底板 |
压壳机 |
NC膜(硝酸纤维素膜) |
检测分析仪(胶体金、 |
样品垫(玻璃纤维素膜、 |
封口机 |
吸水垫(吸水纸) |
划膜喷金一体机/ |
共轭垫(玻璃纤维素膜、 |
恒温干燥箱 |
示踪试剂(胶体金、荧光微球、乳胶微球等) |
离心机 |
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除湿机 |
滤血膜 |
侧向层析免疫测定的原理
LFA的原理很简单:含有相关分析物的液体样品(或其提取物)在没有外力的帮助下(毛细管作用)通过不同区域的聚合物试纸,这些试纸上附着了能与分析物相互作用的分子。
样品加在试纸条样品垫上,样品垫上浸有缓冲盐和表面活性剂,使样品适合与检测系统相互作用。样品中的分析物能够与共轭垫的标记抗体和NC膜上包被的捕获抗体结合。
一个典型的侧向层析测试条由重叠的膜组成,这些膜被安装在一个背板上,以获得更好的稳定性和处理。
检测方法及结果判读
由于LFIA是一种基于特异性抗体的技术,通常分为两种判定方式一种为肉眼目测,此方法多为定性产品,所用示踪试剂常用为胶体金和乳胶微球,但由于示踪试剂本身性质,使得灵敏度不及荧光检测试剂,所以另一种方式通过定量/半定量检测分析仪判读结果(检测系统的选择主要由分析中采用的示踪试剂决定),以提高产品质量和客户的便利性。
侧向层析测定的优势和劣势
许多检测试剂是为在POCT需求点使用而设计的,提供了所需的廉价、快速和简便的测试。因此,LFIA只适用于进行初级筛选。
优势 |
劣势 |
一步法测定,不需要洗涤步骤; |
不准确的样品量会降低精密度; |
感谢观看本期推文,本期主要介绍了侧向层析概念、开发所需设备、检测原理、判读方式及其技术的优劣势,下期将会为大家分享所开发项目的试纸条该如何设计?不同的组装顺序和组件位置又有什么差别?请持续关注我们,为大家持续分享。